Концентрация трипсина: методы Вильштеттера и Бальцера

 

Метод Вильштеттера в модификации Христиансена с алкалиметрическим определением аминокислот в алкогольном растворе. Реактивы: 1) буферный раствор 1 н. NH4CI и 1 н. NН4ОН в равных частях; 2) раствор казеина — 15 г казеина (приготовленного по Гаммарстену) растворяется в 15 мл 0,1 н. NaOH и 150 мл воды и доводится до 500 мл прибавлением дистиллированной воды; 3) индикатор — 2%-ный раствор тимолфталеина в 90° алкоголе; 4) алкогольный раствор — 0,1 н. КОН. В пробирку вводят 2 мл дуоденального сока, 2 мл воды, 2 мл буфера и 6 мл раствора казеина. Тотчас же после смешивания пипеткой переносят в эрленмейеровскую колбочку, содержащую 38 мл 95° алкоголя и 3 мл воды, 6 мл смеси. Это является контролем. Оставшиеся в пробирке 6 мл смеси после 20 мину т пребывания при температуре 30° переносят в другую эрленмееровскую колбочку с алкоголем. В каждую колбочку прибавляют по 1 мл индикатора и титруют 0,1 н. алкогольным раствором КОН до первого посинения, после чего добавляют 70 мл 95° кипящего спирта. Синева исчезает, и титрование продолжают до начала посинения в обеих колбочках.

Разница при титровании контроля и исследуемой пробы выражает триптическую силу 1 мл дуоденального сока, выраженную в 0,1 н. КОН.

Концентрация трипсина выражается в произвольно выбранных единицах и вычисляется на основании следующих расчетных данных.

Нормальное содержание трипсина составляет не менее 0,24 ед.

Читайте: Проба Патцера и капельный метод определения трипсина

Метод Бальцера и Вернера. Реактивы: 1) Казеин, приготовленный по Гаммарстену, 2) буферные растворы: А — КН2РO4— 22,6 г и лимонной кислоты — 55,7 г с добавлением дистиллированной воды в мерную колбу до 500 мл; Б—2,5 н. NaOH; В — 40%-ный раствор формалина; Г — 1 н. NaOH; Д—1%-ный алкогольный раствор фенолфталеина.

Приготовление растворов: 1) к 50,0 г казеина прибавляется 170,0 мл дистиллированной воды и 40,0 мл 1 н. NaOH, после растворения казеина (1,5—2 часа) добавляется дистиллированная вода до 1000 мл; 2) к 100 мл формалина добавляют 10 мл раствора фенолфталеина и оттитровывают до появления розово-красного цвета 0,1 н. NaOH; 3) к 50 мл раствора А добавляется раствор В до рН=8 (раствор сохраняется на холоде в течение месяца). Берется после центрифугирования 0,5 мл сока, добавляется 10,0 мл 5%-ного раствора казеина и 2,0 мл буферного раствора и ставится на 20 минут в термостат при 37—38°, затем добавляется 10,0 мл формалинового раствора и оттитровывается 0,1 н. раствором едкой щелочи до розово-красного цвета.

Каждое исследование проводится с контролем, при этом сок подвергается кипячению. Ошибка исследования ±0,1 мл 0,1 н. раствора едкого натрия.

Разница между опытом и контролем показывает протеолитическую активность на 0,5 мл сока и выражается в мл 0,1 н. NaOH.

У здоровых людей широта активности находится в пределах or 4,0 до 7,5 мл NaOH.

Оставьте комментарий